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GB4789.4-2024沙門氏菌檢驗新標準修訂內容詳解
發布時間： 2024-04-08 點擊次數： 6443次2024-03-12衛健委食品安全標準與監測評估司終于揭開了《GB4789.4-2024 食品微生物學檢驗 沙門氏菌檢驗新標準》神秘面紗，該標準將于2024年08月08日實施，相較于之前的GB 4789.4 -2016標準，新標準在設備和材料、培養基和試劑、檢驗程序和操作步驟等方面都進行了修改和完善。這些變化不僅提高了檢驗的準確性和可靠性，也更好地適應了食品行業的發展需求。
而這些變化具體是怎樣的？下面小編和大家一起來一 一盤點分析：
章節 新標準變更內容 看點分析 設備和材料變更情況 冰箱溫度范圍由2-5℃修改為“2-8℃" 因為冰箱冷藏室的溫度一般在2-8℃之間，修改后更符合大多數實驗室設備條件要求。 增加“恒溫裝置"溫度范圍“42℃±1℃、48℃±2℃" 這“恒溫裝置"小編理解是恒溫水浴鍋或者恒溫電熱箱這類儀器用于培養基或樣品保溫使用，“42℃±1℃"這是沙門氏菌檢驗中選擇性增菌用的培養溫度范圍，其實這溫度范圍放在“恒溫培養箱"那更合適。 增加“無菌量筒：容量50mL、無菌均質杯、無菌均質袋、無菌廣口瓶：容量500mL、無菌試管：15mmX150mm、18mmX180mm、無菌接種環：10L（直徑約3mm）、1L以及接種針" 對檢驗用器具規格明確，方便實驗室選用 增加“生物安全柜" 由于沙門氏菌2023版《人間傳染的病原微生物目錄》中在危害程度分類為第三類，對于實驗室開展活菌操作、樣本檢測實驗室生物安全等級需“BSL-2"，因此，增加此設備是生物安全必須。 培養基試劑 增加“氯化鎂孔雀綠大豆胨(RVS)增菌液" ，刪除“亞xi酸鹽胱氨酸（ＳＣ）增菌" 參考美國FDA BAM Chapter5、ISO6579-1：2017、AOAC等國外標準用 RVS 代替 SC 作為食品中沙門氏菌檢驗的選擇性增菌液，降低培養基對實驗人員危害的風險。 增加“營養瓊脂(NA) " 用于可疑沙門氏菌的純培養。 四硫磺酸鈉煌綠增菌液(TTB)成分用量不變，但pH由“7.0±0.2"修改為“7.6±0.2"；滅菌條件從“高壓滅菌121℃20min"修改為“煮沸,無須高壓滅菌"；牛膽鹽溶液使用牛膽鹽粉替代，硫代硫酸鈉溶液使用硫代硫酸鈉粉末替代。 由于TTB配方含4%碳酸鈣，因而該培養基pH偏堿性，通常是7.6±0.2，其實也很難人為調整至pH7.0±0.2的范圍內，而且pH7.6±0.2也是沙門氏菌的最適生長范圍內，同時能抑制不耐堿的雜菌生長。該培養基抑菌強，因此，不滅菌也不影響使用，且簡化配制節省時間。 其他培養基只是一般性修改，如“牛肉膏"修改“牛肉浸粉，“酵母膏"修改為“酵母浸粉"，以及pH測定統一為滅菌后25℃測。 培養基試劑配方配制更加規范。 其他 關于緩沖蛋白胨水、TTB、RVS、三糖鐵瓊脂等配方中無機鹽含結晶水與不含結晶水的用量修正處理，ISO6579-1：2017有說明。如，緩沖蛋白胨水標準配方中磷酸氫二鈉含12分子結晶水用量9g/L，如用無水磷酸氫二鈉使用3.57g/L。 檢驗程序圖 選擇性增菌用RVS替代了SC培養基，接種量1mL修改為0.1mL； 參考美國FDA BAM Chapter 5、ISO6579-1：2017國外標準修改。 TTB培養溫度從之前的42℃變更為“36±1℃或42±1℃" 根據樣品的背景菌含量選擇培養溫度，，可以有效的防止漏篩 調整可疑菌落初篩流程 流程圖更清晰易懂。 操作步驟-預增菌 增加“對于乳粉,無菌操作稱取25g樣品,緩緩傾倒在廣口瓶或均質袋內225mLBPW 的液體表面,勿調節pH,也暫不混勻,室溫靜置60min±5min后再混勻,置于36℃±1℃培養16h~18h。" 因為乳粉是經過高溫噴霧干燥的產品，其中的沙門氏菌一般處于受損狀態。乳粉在BPW中室溫浸泡1小時緩慢水化，這樣有助于受損的沙門氏菌逐漸復蘇，之后再進行預增菌操作，可以更好地保證檢驗結果的可靠性。 增加“對冷凍樣品可以采用在40℃～45℃的水浴中解凍不超過15min，或在2℃～8℃冰箱中緩慢化凍，但需要主要化凍時間不超過18h。" 操作更細化更完善 操作步驟-選擇性增菌 將之前的"增菌"步驟改成了"選擇性增菌 更加的準確 將SC更換成RVS培養基，接種量從之前的1mL改成了現在的0.1mL RVS弱選擇性，減少接種量減少雜菌干擾 接種后TTB的培養溫度根據樣品的含菌量來進行區分，低背景菌的樣品(如深加工的預包裝食品等)置于36℃±1℃培養18h~24h,高背景菌的樣品(如生鮮禽肉等)置于42℃±1℃培養18h~24h" 培養溫度選擇更精準，有利于降低雜菌量，提高檢出率 新增“如有需要，可將預增菌的培養物在2-8℃冰箱保存不超過72h，再進行選擇性增菌" 操作更靈活，大大降低了周末加班的需求 分離 補充劃線前“振蕩混勻選擇性增菌的培養物" 細節描述更加詳細清楚，規范化操作 新增“如有需要，可將選擇性增菌的培養物在2-8℃冰箱保存不超過72h，再進行分離" 操作更靈活，大大降低了周末加班的需求 生化試驗 可疑菌落挑選數量 “2個以上典型或可疑菌落“修改為"4個以上典型或可疑菌落" 新標準詳細說明這些菌落宜分別來自不用的選擇性增菌液的不同分離瓊脂，也可以選擇其中一個典型或者可以的菌落進行試驗（對于有經驗的實驗員可以大大降低其工作量） 純化培養基營養瓊脂（NA）后面補充說明（或其他合適的非選擇性固體培養基） 也就是說，TSA、PCA這些非選擇行固體培養基可替代營養瓊脂。 附錄A.12.3qing化鉀培養基試驗方法有修改“將待測菌的純培養物用生理鹽水配制成0.5麥氏濁度的菌懸液,滴加2滴~3滴菌懸液于qing化鉀(KCN)培養基,混勻后滴加一層無菌液體石蠟進行密封。另外滴加2滴~3滴菌懸液于對照培養基。在36℃±1℃培養24h~48h,觀察結果。qing化鉀(KCN)培養基內有細菌生長者為陽性(不抑制),培養48h無細菌生長者為陰性(抑制)。" 明確接種菌液濃度為“0.5麥氏濁度"，接種量“2滴~3滴"，避免接種量過大導致假陽性；還有增加＂接種混勻后滴加一層無菌液體石蠟進行密封＂由于qing化鉀不穩定容易分解失效，因此，加石蠟密封避免造成假陽性反應。 “符合表3中A1者,為沙門氏菌典型的生化反應"后面補充“進行血清學鑒定后報告結果" 明確的指出符合沙門氏菌典型的生化反應需要進行血清學鑒定后報告結果 2016版“必要時按表５進行沙門氏菌生化群的鑒定"修改為2024版中“必要時,按表5進行沙門氏菌種和亞種的生化鑒定" “生化群"用“種和亞種"替代，更易懂； 在表5沙門氏菌種和亞種的生化鑒定中增加“腸炎沙門氏菌、邦戈爾沙門菌種名"以及腸炎沙門氏菌種內對應的6個亞種和生化群分型"；生化反應項增加“明膠酶、L(+)-酒石酸鹽、半乳糖醛等8項" 表5 是在確定是沙門氏菌屬基礎上再進一步鑒定至種和亞種時使用，這一般高要求能力驗證項目會用到，對于食品微生物限liang檢驗，鑒定到沙門氏菌屬即可報告結果。 多價菌體抗原(O)鑒定 Vi抗原去除的煮沸操作修改為“在沸水中水浴20min~30min" 操作更明確 增加備注“不同廠商沙門氏菌診斷血清的組成、鑒定操作及結果判斷,可能存在差異。使用商品化的沙門氏菌診斷血清進行血清學鑒定時,應遵循其產品說明。“ 備注了不同廠商因為血清組成不同，可能存在差異，應以產品說明為準。 H 抗原的鑒定 2016版的“小倒管法"修改為2024版的“小套管法"，對半固體瓊脂的體積、小玻管的尺寸、接種后的培養溫度有了更為準確的敘述；培養基的使用溫度從50℃改為48℃。 操作描述更詳細更嚴謹。
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